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              公司動態

              BioTek食品安全微孔板檢測解決方案

              文字:[大][中][小] 手機頁面二維碼 2017/12/19     瀏覽次數:    

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        引自:微信公眾號 BioTek 中國

              談到食品安全檢測,可能大多數人聯想到的是各種,往往高昂的成本和復雜的操作讓人望而生畏,這是由于目前用于食品安全檢測的方法中,薄層色譜(TLC) 樣品預處理復雜,且不能定量,靈敏度低;微生物法不易篩選到特別敏感的菌株,也只能定性不能定量,易受其他抗菌藥物的影響;氣象色譜(GC) 及高效液相色譜(HPLC)等雖靈敏度高,但設備昂貴,樣品預處理復雜,檢測費用高,難以推廣使用;

               

              其實,越來越多的基于微孔板系統的檢測方法,能夠輕松實現多項食品安全檢測的項目,并且具有靈敏度高、干擾小、安全性好、污染少及操作便捷等諸多有點。本著兼容并進的主旨,大家不妨來看看BioTek提供的食品安全微孔板檢測解決方案這份大餐。

               

              NO1.——酶聯免疫吸附ELISA-解決方案

               

              酶聯免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技術20世紀70年代出現以來,就因其特異性高、敏感性強、簡單迅速,不需要昂貴儀器設備,特別適合于對大量樣本的篩檢工作等優點,成為食品檢驗中較為廣泛應用的方法之一。

               

              首先來看看國家標準/行業標準中涉及的基于酶聯免疫分析的項目:

               

               

              針對不同的檢測通量需求,BioTek貼心提供兩種方案選擇:

               

              PlanA 酶聯免疫吸附實驗解決方案:低通量

               

              PlanA是針對每日檢測量有限的較低通量用戶,主要結合了BioTekELx808ELx800全自動酶標儀以及ELx50全自動洗板機。

              ELx808全自動酶標儀具有精準的溫度控制和超快的檢測速度;ELx800小巧堅固,性價比極高。ELx50全自動洗板機主要為8、12道或16道孔板清洗所設計,并具有磁珠和濾板清洗模塊可選。兩款酶標儀都可以和ELx50全自動洗板機相互配合,完成ELISA操作中的孔板清洗和檢測讀數,非常適合日常操作通量在20塊板以下的實驗室。

              這樣的組合搭配可以滿足小型分析,檢測實驗室或工業檢測實驗室的日常需求,并且在全球擁有大量的在用客戶。

              如果檢測項目多,檢測波長多樣,也可以考慮全波長微孔板分光光度計計用于數據的檢測,EpochEpoch2則是非常好的選擇,可以滿足200-1000nm全波長的檢測和光譜掃描,無需更換濾光片和光源。

               

              PlanB 酶聯免疫吸附實驗解決方案:高通量

               

              當您的日常檢測以96孔板為基準單位,批量測量,則可以選擇BioTek405系列洗板機,可以滿足96/384孔板的全板快速清洗;

              如果您在加樣方面也有自動化的需求,EL406洗板分液系統則可以進行三種試劑的分液操作和全板清洗。作為洗板行業的金標準,專利的超聲清洗與堵針探測功能可以極大的降低實驗操作失敗的風險,而細胞清洗、磁板和濾板清洗功能則極大的拓展了產品的應用領域。

              如果您的日常操作通量超過20塊板,則可以和BioTek的自動疊板器BioStack相互對接,高通量完成孔板的傳輸操作。

              另外如果希望能夠全自動的完成ELISA的操作流程,則可以選擇BioSpa8自動化孵育器,其上所攜帶的機械手可以和BioTek的洗板機、微孔板檢測儀相互對接,同時完成孔板的孵育、加樣、清洗與檢測等流程,并可以放置于超凈工作臺內,進行長達2周的自動化流程操作,讓您免除繁復的人工操作,如下圖所示:

               

              NO.2 水產品新鮮度解決方案

              水產品(魚、蝦、貝類等)新鮮度是評價水產制品質量的一個重要指標。例如魚肉的生化變化相當復雜, 僅憑單一指標或測定方法來確定魚的鮮度有一定的難度。目前測定魚鮮度的方法有感官評價法、微生物學檢測法、物理和化學法及生物傳感器法等。生物傳感器法具有體積小、靈敏度高、檢測步驟簡便、快速、可靠等特點,下面我們主要介紹NOVOCIB公司推出的水產品新鮮度檢測試劑盒法。

              那么,生物傳感器法的原理是什么呢?

              魚、蝦等生物死亡后,其肌肉中的ATP含量隨之下降,ATP的含量可以代表魚、蝦的新鮮程度,因此生物傳感器法是對魚蝦肌肉中ATP代謝產物的含量進行測定,這些代謝產物的含量高說明新鮮度低。

              本方法主要檢測ATP的三個主要代謝產物
              1,IMP(次黃苷酸)IMP,

              2,Inosine(肌苷): Ino

              3,Hypoxanthine (次黃嘌呤):Hx


              ATP代謝示意圖(什么,為什么會是這三個代謝產物?趕緊好好復習一下生物化學吧)

              對于以上三個看不見也摸不著的ATP代謝產物,偉大的生物化學家們發明了基于酶學的底物顯色法從而使用顏色來追蹤這些分子,由于需要檢測三種代謝產物,因此也需要三種不同的酶及輔因子:

              其中,

              1可以將IMP全部轉化為NADH

              2可以將IMPHx全部轉化為NADH

              3可以將IMP、HxIno全部轉化為NADH

              通過340nm吸收光檢測來測定NADH的量

              知道了原理后,我們如何測定?

              簡而言之,使用該生物傳感器的檢測方法就包括樣品提取、加樣布板、添加底物、孵育和檢測這幾個步驟,完全不需要洗滌哦。布板方式如下:


              96孔板布板圖,每塊96孔板可檢測11種水產樣品,按照圖示區域添加酶混合物即可。

              可能忙碌的你會問:又是96孔板添加樣品!如果每天我要測成千上百條魚的新鮮度,這樣加樣豈不是累煞我也?不用擔心,BioTek總會為您提供較貼心的解決方案,您完全可以使用Precision Power XS自動化移液工作站來完成所有的加樣步驟。

              Precision Power XS自動化移液工作站

              PrecisionTM是一款全新的液體處理操作系統??梢詫崿F多種的液體轉運流程,是替代繁復手工移液分液的理想產品。

              PrecisionTM系統特點
              1. 替代手工加樣
              2. 可選單道、8道、12道移液以及大體積分液
              3. 體積小巧,可置于標準大小的生物安全柜內
              4. 廣泛兼容試管、96384孔微孔板
              5. 獨特的槍頭拾取技術
              6. 液面感應
              7. 經濟型高端液體處理系統
              8. 使用Precision Power軟件更易于安裝和程序操作
              9. 可與自動化BioStack儲板器相互整合

              加好樣的96孔板送入BioTek具備吸收光檢測的儀器中讀取340nm的吸收光即可完成測定(例如EpochEpoch2),后續通過以下的運算公式,可以定量APT的三種代謝產物的百分比含量,而這個步驟,也可以通過Gen5的數據處理記憶模塊自動完成:

              水產品新鮮度測定數據處理方法

              Epoch系列微孔板分光光度計

              全新的EpochTM 2 微孔板分光光度計采用光柵式設計,溫控范圍寬、震蕩形式多樣,極大的拓展了在生命科學實驗中的應用范圍,從DNA、RNA和蛋白的定量到長時動力學監測均可以勝任。用戶可以通過Epoch2的超大彩色觸控屏完成程序的編輯和數據分析,其Wifi和藍牙功能也為用戶提供了便捷的人機交互功能。

              Epoch2系統特點
              1. 兼容6-384孔微孔板,可選比色杯檢測模塊
              2. 200-999nm全波長檢測,無需更換濾光片
              3. 專利的溫控模塊,較高可達65
              4. 支持線性、軌道及雙軌道震蕩模式
              5. BioStackTM和第三方自動化設備兼容
              6. 兼容Take3微量樣品檢測模塊,較低可檢測2μL的樣品點
              7. Gen5觸屏和PC儀器控制及數據分析軟件

              因此,BioTek提供的水產品新鮮度測定的解決方案示意圖如下所示:

               

               

              NO.3 抗氧化能力指數(ORAC)解決方案

              抗氧化能力指數(Oxygen Radical Absorbance Capacity, ORAC)是一種測量不同食品抗氧化能力的國際通用標準單位,即umol TE/100g,以平均總ORAC數值表示食物的抗氧化能力,檢測數值愈高代表其抗氧化能力就愈強??陀^的評價脂溶性物質的抗氧化活性,有助于人們有意識的選擇必要的食品,提高健康水平和生活質量。

              測定抗氧化能力指數的原理又是什么呢?

              這個方法以偶氮類化合物AAPH作為過氧自由基來源。Sodium Fluorescein為熒光指示劑,其熒光基團會受到氧自由基的影響而改變熒光能力;維生素E水溶性類似物Trolox為定量標準,繼而通過熒光微孔板分析儀進行分析。該方法廣泛應用在糧食生產貯存、進出口檢疫、乳品、食用油等領域。

              檢測方法

              1、樣本前處理:生鮮等提取物、生育酚陽性對照同熒光素溶液充分混合孵育;

              2、AAPH氧自由基供體加入,需使用儀器自動進樣器,隨后開始動力學監測,動力學間隔1min,持續1~2h,37℃恒定溫度。

              3、檢測波長:485/528nm

              4、計算方法:分別計算生育酚和樣品的AUCNet AUC

                抗氧化劑作用下的熒光衰退曲線下面積與無抗氧化劑存在時自由基作用的熒光衰退曲線下面積之差,即熒光熄滅曲線的延遲部分面積Net AUC為抗氧化劑的保護面積(圖中斜線面積)。
              抗氧化劑的氧自由基清除能力ORAC值,又稱為抗氧化劑的抗氧化能力指數,是通過熒光衰退曲線的保護面積與標準抗氧化物質的保護面積相比得出。

               

               

              由于該方法需要使用熒光強度動力學讀數,所以我們推薦使用BioTekFLx800Synergy機器以上的機器進行檢測,可以為您帶來較便捷的操作體驗。

               

              ORAC檢測工作流程

              使用該方法的注意事項:

              1,對pH值敏感,應采用緩沖液體系,保持pH7左右,

              2,對溫度有要求,動力學需要控制在37攝氏度。

              相關認證

              目前受大眾引用的食物抗氧化值列表為ORAC-07,出自美國農業部USDA非美國食品藥物管理局FDA

              參考文獻:Nature Protocols 2, 867 - 870 (2007)此篇文章中使用儀器即為Synergy系列

              NO.4 熒光偏振檢測解決方案

              我們上一期介紹了基于吸收光的ELISA檢測方法,這里我們想要推薦的是一種基于偏振光的檢測法——熒光偏振免疫檢測法,這是一種均相檢測法,相對于ELISA而言,無需多次的清洗步驟,主要原理是熒光標記的毒素在樣品緩沖液中與未熒光標記的毒素對特異性抗體的競爭性結合,分子質量越大,分子旋轉速度越慢,熒光偏振值越大。特點是靈敏、快速、簡單且成本低。

              熒光偏振檢測的原理

              熒光偏振是Perrin1926年較初提出的一種熒光檢測技術。主要是觀察溶中的熒光分子,偏振光激發時,將發射偏振光,由于熒光分子的旋轉,發射光的水平光強和激發光的水平光強將會不同。熒光信號的偏振和分子旋轉速度相關,旋轉速度又受溶液的粘度、絕對溫度、分子體積和氣體常數影響。如果保持粘度、溫度恒定,那么旋轉速度的變化主要取決于分子體積和分子重量。


              熒光偏振原理示意圖

               主要檢測流程

               

               該方法主要用于檢測真菌毒素類

              黃曲霉毒素≥ 10ppb
              煙曲霉毒素≥1ppb
              嘔吐毒素≥1ppb

              相應認證

              1. 獲得美國農業部(USDA)認證
              2. 美國谷物檢查、包裝、儲存管理局(GIPSA)的認證檢測方法

              應用領域
              糧食生產貯存、進出口檢疫、乳品、食用油等

                   這一期我們為大家獻上了我們為大家主要介紹了基于ELISA為檢測原理的食品安全微孔板檢測方案,水產品新鮮度、ORAC檢測以及真菌毒素測定的微孔板解決方案,其實隨著微孔板檢測技術的發展,也出現越來越多的針對該領域的新方法,比如針對轉基因食品安全性問題而開發的ELISAPCR-ELISA檢測方法等等,如果您對以上我們提到的食品安全檢測感興趣,那就快和我們聯系吧!

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